[恐龙原创]Kromasil 100－5 C18柱出什么问题了？

此贴原来发在中国色谱网上，时间大概在2004-2005年，是《实用色谱技术问答》的一个问答，现在重新修改一下，提供给大家。

更新后的帖子来源于色谱博客网（www.sepublog.com）：
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3.1.2   问：Kromasil 100－5 C18柱出什么问题了？

问：有网友提到新买了一根Kromasil 100－5 C18柱，刚开始用时效果较好，条件为30 mMKH2PO4，pH=2.0，柱温30°C。连续使用两天后，各标准品峰明显前移。有些原来能分开的峰现在分不开了。最近我继续使用该柱，不同的是每天连续使用时间不超过12小时。使用后先用5%甲醇/水冲洗，再用100%甲醇冲洗。这样使用了三天，峰的保留时间不再前移。因此，我有二个问题：

（1）峰的前移是由于C18被水解的缘故吗？如不是，又是什么原因呢？

（2）对于使用低pH纯水系缓冲盐的C18柱，每天使用12小时，用5%甲醇/水洗净缓冲盐，再用甲醇冲洗，能延长C18柱的使用寿命吗？

答：（酸菜、jayee、恐龙、fanny、半透膜、杨光、sunear等参与）使用Kromasil 100－5 C18出现这种情况是不了解这种柱子的特性。关于上面的二个问题，作如下分析：

（1）峰前移的原因是使用了纯水流动相的缘故。kromasil填料以高碳覆盖量而自豪，在纯水（或水比例大于95%）的环境下因为C18官能团非极性排斥，会使伸展状态的官能团在排斥力的作用下“倒伏”，同时也因极性力形成的张力使“水膜”在填料微孔口形成而覆盖微孔口，这两点都使分析物难以与C18官能团接触，保留时间因此提前。极端情况下，甚至丧失保留性质。不仅是C18，对于Kromasil的其他填料，都不推荐用纯水（或水比例大于95%）的流动相。

（2）其后提到“最近我继续使用该柱，不同的是每天连续使用时间不超过12小时。使用后先用5%甲醇/水冲洗，再用100%甲醇冲洗。这样使用了三天，峰的保留时间不再前移”。这正是采用了正确的方法。用甲醇或乙腈等纯溶剂冲洗较长时间，可以使“倒伏”的官能团回复其原有状态，之前用5%甲醇水溶液洗去盐再用纯甲醇是非常地道的做法！

（3）一般不提倡对Kromasil柱使用纯水流动相。非要这样用，我也建议你用预柱，缩短使用时间；及时冲洗、隔夜封存于纯有机溶剂都是很好的柱维护措施。

另外，是否可在流动相中添加5%的甲醇或乙腈，如不影响分离情况和峰形的话。

其它类型的C18也有这种现象，只是没有Kromasil柱明显。为了克服纯水溶剂长时间运行产生“水性坍塌”对色谱柱分离造成的影响，现在市场上有多种新型的色谱柱可以在100％水相中使用（如带AQ标识），稳定性良好。