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shadowgba 发表于: 2007-3-10 22:33 来源: 化学工作者园地
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原帖由 shadowgba 于 2007-3-11 01:42 发表 因为都5知道发去边好，但又急住想知道答案，可惜都系无人答:@
原帖由 cation 于 發表於: 2007-03-11, 19:43 要想在結構類似的分析物之中再做更細的分離, 你得找一個更適合的靜相, 在這裡silica gel會比現在所用的AB-8樹酯要適合(AB-8是個弱極性吸附劑,對一般植物中的成分,吸附力不大, 只能做到粗分),前者的極性大, 對於具極性之有機物有較強的吸附力, 唯有在足夠的吸附力之下,才能夠以調整沖提液極性的方式,將分析物依照其極性, 由小至大, 一個一個洗脫出來！ 不知道發問者有無使用矽膠管柱淨化的經驗, 第一次使用的話會比較麻煩, 要先搞清楚一些矽膠的活性及沖提方式等的原理......暫時先答到這邊,等進一步的訊息再回應！
原帖由 shadowgba 于 2007-3-11 15:52 发表 我查过文献，里面提到用AB-8大孔树脂---微滤方法来提取苦参中的总黄酮类化合物比较有优势， 苦参所含黄酮类化合物多为二氢黄酮及二氢黄酮醇类，亦有黄酮，异黄酮，查尔酮等，还有很少得甘类，而我最后想要得是在这粗品得总黄酮类化合物中的二氢黄酮类都是甘元（二氢黄酮甘为弱极性得吧，那么用弱极性得AB-8树脂不是更合适了吗？），但是我就不知道该怎么在这粗品得总黄酮中萃取提取出里面得二氢黄酮了，不知道用哪种试剂去萃取分离，要是用柱子去洗脱哪又该用哪个溶剂系统好呢？
原帖由 Cation 于 2007-03-11, 20:37发表 你可以把AB-8樹酯所得的黃酮類洗脫液, 濃縮後在以矽膠柱再做一次分離,這樣干擾會大大減少。 你用 AB-8樹酯當然也未必分不出來二氫黃酮, 但你只用單一一種成分的洗脫液(50%的乙醇),我想這種成功的機率是很低的！ 你所得到的大概就是把所有的總黃酮都一起提取出來了！ 另外,低極性物質用低極性的吸附劑這種觀念是有問題的,你要考慮基質中其他的干擾物是甚麼, 在這邊,你只要提取二氫黃酮類,那麼其他的黃酮類就是它的干擾物, 在這種狀況下,使用一種低極性的吸附劑只會降低淨化管柱的選擇性,除非在沖提液可以做到有更"細微"的極性變化, 不然的話,沖提液的極性只要有稍微一點的變化, 你的黃酮類分析便會一起被沖提出來,根本無"解析度"可言！ 吸附強的靜相,才會把你的分析物由在管柱中久一點,這才有分離的機會, 這和GC及HPLC的分離是一樣的道理！在GC中, 一開始便施加烘箱高溫, 分析物下子就都出來了,那些結構相近的東西,它們的分離度會好嗎？
原帖由 Cation 于 2007-03-11, 21:07发表 用Silica jel管柱, 溶劑系統就是先以乙醚為起始沖提液, 逐漸加入不同比例的dichloromethane 來調整極性, 這兩種溶劑無法完全洗脫時, 再來考慮其他溶劑! 這種分離的測試階段,通常都需要一段時間, 如果不純熟的話會更久, 但通常有經驗之後,對於溶劑比例的就會很容易掌握了～
原帖由 shadowgba 于 2007-03-11, 21:07发表 对啊，我系想把苦参种得甘元类的总黄酮类先提取出来，然后再进行进一步得分离精制
原帖由 shadowgba 于 2007-03-11, 22:19 发表 开始用50%乙醇洗脱的目的主要是要苦参里面极性小的甘类总黄酮类都一起提取出來了，而不是分离，我也想过粗提后的总黄酮再用硅胶再洗脱分离，但苦参里面总黄酮又那么种，该怎么用较好的溶剂去洗脱就是重点。那么能否先用两相萃取，把总黄酮在甲醇和正己烷中分配，溶于甲醇的部分继续在氯仿和水种分配，分别得到溶于正己烷、氯仿和水的部分，再反复上硅胶层析。 用二氯甲烷好吗？那正己烷如何？ 补充下，用大孔树脂是因为它极性小，能先把极性大的洗脱下来，而你用硅胶是先把极性少的先洗洗来是吧。
原帖由 Cation 于 2007-03-11, 22:43 发表 1. 不贊成以AB-8所獲得之總黃酮類洗脫液, 再接著以L-L萃取(MeOH-hexane)來獲得溶於甲醇的部分, 技術上,憑藉著同樣的一支淨化管柱即可達到相同的目的！silica gel管柱一開始就以100%n-hexane沖提即可達此目的！ 2.沒錯！ 矽膠管柱先被沖提出的是極性小的分析物！
原帖由 shadowgba 于 2007-03-11, 22:53 发表 我想这个符合你的吧 A) Al2O3柱层析：氧化铝为固定相，105度烤干1h后，装到玻璃层析柱内（2×30cm，上柱高度为15cm）用甲醇浸泡24小时。上样：将样品浓缩到合适浓度后，与少量Al2O3混合成半固体状，小心加入到装有Al2O3 的层析柱后，再加入一层Al2O3后，在固定相上覆盖一层滤纸，备用。流动相：采用浓度梯度法分别加入CH2Cl2、CH2Cl2/MeOH2.5%、CH2Cl2/MeOH5%、CH2Cl2/MeOH10%、CH2Cl2/MeOH40%。AL2O3层析柱应用范围广，主要适用于分离异黄酮，二氢黄酮，二氢黄酮醇及高度甲基化或（乙醚化）的黄酮及黄酮醇类。因为AL2O3的极性大，它可以吸附极性大的成分，而我们可以得到极性小的和极性中等的成分，而将极性中等的成分（Glabridin所含的部分）进一步用硅胶柱来分离。 B）硅胶柱层析：将上一步用AL2O3柱初分后的中等极性组分，要上硅胶层析柱进行分离（方法同上）。流动相依次为：CH2Cl2、CH2Cl2/MeOH2.5%、CH2Cl2/MeOH5%、CH2Cl2/MeOH10%、CH2Cl2/MeOH40%。选用的层析柱为口径为2×20 cm，上柱高度为15cm。
原帖由 shadowgba 于 2007-03-11, 22:57 发表 能用极性不同的溶剂法提取吗？
原帖由 shadowgba 于 2007-03-11, 23:04 发表 那么请教下，你能又一个更好的方法从苦参粉末中提取到二氢黄酮类吗？
原帖由 Cation 于 2007-03-11, 23:13 发表 1. 淨化管柱靜相的使用,不是用極性大的吸附劑來吸附極性大的成分, 而是當分析物極性較小時,反而要找那些吸附力比較強, 類似像alumina oxide這一類的東西來當靜相。 2. 你的分析淨化工作,我覺得只要管柱的靜相的量夠多,一支淨化管柱即可達到目的,並不是一定得分兩次來做！ 3. 上面的alumina oxide及silica jel這兩者而言, 前者之吸附力大於後者, 我反而認為silica gel比較適合做粗分的工作, 吸附大的靜相,比較容易在沖提液方面有多方面的變化,利於做較精細的分離！
原帖由 cation 于2007-03-11, 23:18 发表 [quote]原帖由 shadowgba 发表 那么请教下，你能又一个更好的方法从苦参粉末中提取到二氢黄酮类吗？
原帖由 Cation 于 2007-03-11, 23:38 发表 [quote]原帖由 shadowgba发表 能用极性不同的溶剂法提取吗？
原帖由 shadowgba 于 2007-03-11, 23:33 发表 聚酰胺柱 硅胶柱和Al2O3柱比较下，用哪个更适合提取分离众多黄酮化合物中的二氢黄酮类？
原帖由 Cation 于 2007-03-11, 23:36 发表 上述三者中聚醯胺管柱最適合！
原贴由Cation发表 [quote]原贴由shadowgba发表 那么请教下，你能又一个更好的方法从苦参粉末中提取到二氢黄酮类吗？
原帖由 shadowgba 于 2007-03-11, 23:38 发表 [quote]原贴由Caion发表 很少有這種機會是利用極性不同的溶劑來提取, 通常都是要靠兩種不同的溶劑來調整沖提液的極性, 有時甚至實用到三種(這還很常見)或者是四種溶劑！
原帖由 Cation 于 2007-03-12, 23:38 发表 像alumina oxide及Silica gel這一類靜相的沖提液,不外乎methanol, dichloromethane, ether, n-hexane等,在某些狀況下, toluene或benzene都可以派的上用場, 不過極少使用, 整個淨化的流程中,只有一個要點, 那就是沖提液的極性要由低而高, 也就是說,如果一開始就是使用100%的甲醇,那就是所有的東西一起流出管柱, 根本毫無分離能力, 除非你所使用的alumina oxide或Silica gel對於分析物有極大的吸附力！ 通常如果是100%n-hexane先登場, 那就大概可以沖提出一些直鏈烷類的東西(假設分析物是甚麼東西都有的話), 再加入一點ether或CH2Cl2來調整極性後(當然,加入CH2Cl2所的溶劑極性,或比ether要大), 之後接著就會有含側鏈的烷類, 帶苯環的烷類....等等隨沖提液的極性增大,出來的東西極性也會越大......當然在這邊沒辦法跟你說的很清楚, 像上面所說的還是溶劑方面,當溶劑沖提始終找不到條件時,還得在靜相的活性方面動腦筋。 樣品的淨化, 完全是一門動手做的學問, 即使書本有記載的,都祇是一些基本的基礎觀念, 其餘的就是需要自己動手去做, 從不斷的失敗中吸取一次又一次經驗, 等到有一天你突然發現可以在很少的時間內抓到沖提條件時,大概就可以算是"學有所成"了！ 我就曾經說過,要訓練一位完全純熟有開發分析條件的樣品淨化分析員,大概得花上3年的時間, 不過你看到這邊也不要嚇到, 你的實驗可以先去找現成的paper, 如果實在找不到, 也不要考慮太多,直接就先開始準備該有的實驗器材, 動手做第一次的淨化測試, 由第一次的結果再慢慢修正的分離出來為止！ 第一次也只能建議先用ether+CH2Cl2(9:1)的比例, 不作梯度沖提 每10mL收集在一個試管,然後去run HPLC、GC或者是GC/MS......看看都會有些甚麼東西出來！！？ 另外, 最好能有GC/MS等一類的質譜工具,有時候碰到干擾物時,可以藉由質譜先確定是甚麼東西後, 直接調整沖提液來除去,可以節省很多時間！
原帖由 shadowgba 于 2007-3-12 02:37 发表 谢谢cation，昨晚我等你回答等了很久，因为急着写好方案去申请做实验。最后想了很多，而大概得都和cation老师得差不多，就连溶剂系统都一样，本来没多大信心得，现在看了你写的信心就大了，呵呵。有空又再来泡泡学习下。
最新回复
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楼上的兄弟您好。关于这个问题我想还是属于分离萃取的范围我不是很熟悉这个，我推荐您去台湾Cation老师的论坛：“http://www.cation.idv.tw/phpbb2/index.php” 请教一下Cation老师，他是这方面的专家！
抱歉无法回答您的问题，感谢您的光临，愿您尽快找到答案
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[ 本帖最后由 化学工程师 于 2007-3-14 13:15 编辑 ]QUOTE:
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老實說很難！ 即是同一種靜相,在不同活性強度的狀況下,所使用的溶劑沖提比例及用量都會不一樣,這種事情只能告訴你該用哪些溶劑以及大概的比例, 然後靠實驗者動手去先測試一個結果後, 看結果再來調整下一次的測試條件！[/quote]QUOTE:
很少有這種機會是利用極性不同的溶劑來提取, 通常都是要靠兩種不同的溶劑來調整沖提液的極性, 有時甚至實用到三種(這還很常見)或者是四種溶劑！[/quote][ 本帖最后由 化学工程师 于 2007-3-14 13:37 编辑 ]
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老實說很難！ 即是同一種靜相,在不同活性強度的狀況下,所使用的溶劑沖提比例及用量都會不一樣,這種事情只能告訴你該用哪些溶劑以及大概的比例, 然後靠實驗者動手去先測試一個結果後, 看結果再來調整下一次的測試條件！[/quote]那请您指导下哪些溶劑以及大概的比例，谢谢。这样能为我实验带来很大参考。
[ 本帖最后由 化学工程师 于 2007-3-14 13:52 编辑 ]
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不好意思，我的想法是你说的样“靠兩種不同的溶劑來調整沖提液的極性”，但表达错了，那么能给我个好的提示吗？介绍下你的经验中用到的溶剂和比例好吗？或者是些建议。[/quote]QUOTE:
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